Plásmido CRISPR de Activación (h) HDMCP: sc-415327-ACT

El gen humano SLC25A47 codifica el transportador de la membrana interna mitocondrial HDMCP, un miembro de la familia de transportadores de solutos implicado en el control del intercambio de metabolitos mitocondriales y de la eficiencia respiratoria. La actividad de HDMCP se asocia con la regulación de la fosforilación oxidativa, el potencial de membrana mitocondrial y programas más amplios de homeostasis energética que coordinan el uso de nutrientes en tejidos metabólicamente activos. La expresión alterada de transportadores mitocondriales, incluido HDMCP, se ha relacionado con desregulación del metabolismo de lípidos y glucosa, estrés oxidativo y cambios de señalización que influyen en la adaptación celular a la demanda energética. En consecuencia, SLC25A47 es de interés para estudiar la bioenergética mitocondrial, la remodelación de vías metabólicas y los mecanismos que conectan la función mitocondrial con fenotipos relevantes para enfermedades.

HDMCP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC25A47 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HDMCP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC25A47 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC25A47, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HDMCP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC25A47 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HDMCP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HDMCP en células tumorales con expresión de SLC25A47 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.