Particules Lentivirales d'Activation (h) hDcp2: sc-418511-LAC

DCP2 code pour l’enzyme humaine de décapsidation des ARNm hDcp2, un composant central du renouvellement cytoplasmique des ARNm qui retire la structure de coiffe 5′ afin d’initier la dégradation 5′→3′. Par sa fonction au sein du complexe de décapsidation, avec des cofacteurs tels que DCP1 et des activateurs de la décapsidation, hDcp2 contribue au contrôle qualité des ARN, à la dynamique des corps de traitement (P-bodies) et au remodelage du transcriptome en aval des réponses au stress et des changements d’expression génique dépendants de la signalisation. La dégradation régulée par DCP2 s’interface avec des voies qui contrôlent la traduction, la surveillance des ARN et l’adaptation cellulaire aux signaux environnementaux, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la régulation post-transcriptionnelle. Des altérations de la décapsidation des ARNm et une dérégulation de la stabilité des ARN ont été associées à des programmes d’expression génique liés aux maladies, ce qui soutient l’étude de DCP2 dans des modèles de signalisation oncogénique, de neurobiologie et d’interactions hôte–pathogène.

Les particules d'activation lentivirales hDcp2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DCP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales hDcp2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DCP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de hDcp2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DCP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.