HAS2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420798-ACT

Das Mausgen **Has2** kodiert die Hyaluronan-Synthase 2 (HAS2), ein Plasmamembran-Enzym, das Hyaluronan polymerisiert – ein wichtiges Glykosaminoglykan der extrazellulären Matrix. Die durch HAS2 angetriebene Hyaluronanproduktion moduliert die Organisation der perizellulären Matrix, ihre Hydratation und die Mechanotransduktion und beeinflusst dadurch Zellmigration, Adhäsion und Proliferation über Interaktionen mit Rezeptoren wie CD44 und RHAMM. Die Regulation von **Has2** verknüpft entwicklungsbedingte Morphogenese und Gewebeumbau mit Signalnetzwerken, darunter TGF‑β, ERK/MAPK und entzündliche Signale, die die Dynamik der extrazellulären Matrix umgestalten. Eine veränderte HAS2-Aktivität und Hyaluronanmenge werden mit fibrotischem Remodeling, Gefäßpathologien und der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, wodurch **Has2** ein nützlicher Knotenpunkt für die Untersuchung matrixabhängiger Phänotypen in vivo und in kultivierten Mauszellen ist.

HAS2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Has2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HAS2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Has2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Has2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HAS2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Has2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HAS2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HAS2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Has2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.