Plasmide CRISPR d'Activation (h) HAS2: sc-401032-ACT

Le gène humain **HAS2** code l’hyaluronane synthase 2, une enzyme de la membrane plasmique qui polymérise l’hyaluronane, un glycosaminoglycane majeur de la matrice extracellulaire régulant l’hydratation des tissus, leur viscoélasticité et l’assemblage de la matrice péricellulaire. La production d’hyaluronane induite par HAS2 façonne les programmes d’adhésion et de migration cellulaires via les voies de signalisation **CD44** et **RHAMM**, et s’articule avec l’EMT, les signaux inflammatoires et les voies de mécanotransduction qui remodèlent le microenvironnement tumoral et le stroma fibrotique. Le contrôle transcriptionnel de HAS2 intègre des signaux provenant de TGF‑β, de NF‑κB et des facteurs de croissance, reliant la dynamique de la matrice extracellulaire aux programmes de prolifération et de réponse au stress. Une activité dérégulée de HAS2 et l’accumulation d’hyaluronane sont fréquemment étudiées dans l’invasion et la métastase cancéreuses, la fibrose, le remodelage vasculaire et les pathologies inflammatoires.

HAS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HAS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HAS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HAS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HAS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HAS2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HAS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HAS2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HAS2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HAS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.