HAPLN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403874-ACT

HAPLN1（ヒアルロン酸・プロテオグリカン結合タンパク質1）は、細胞外マトリックス（ECM）の糖タンパク質で、ヒアルロン酸とコンドロイチン硫酸プロテオグリカンからなる凝集体を安定化し、マトリックスの組織化と組織の生体力学的特性を支えます。特に軟骨や結合組織における役割でよく知られており、細胞周囲マトリックスの完全性維持に寄与するとともに、細胞接着、遊走、メカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）に影響します。HAPLN1の機能はECMリモデリングのプログラムや、マトリックス組成に応答するシグナル伝達経路（インテグリン依存性および増殖因子依存性のカスケードなど）とも交差します。HAPLN1の発現異常やマトリックス構築の破綻は、変性および線維化の過程と関連づけられており、腫瘍―間質相互作用や転移ニッチのリモデリングを扱う研究でしばしば評価されます。

HAPLN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HAPLN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HAPLN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HAPLN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHAPLN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HAPLN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHAPLN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHAPLN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHAPLN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHAPLN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。