Plasmide Double Nickase (h) HAH1: sc-404870-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HAH1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HAH1 Double Nickase (h) et le plasmide HAH1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATOX1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HAH1 Antibody (D-9): sc-398742
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HAH1 | sc-404870-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HAH1 | sc-404870-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATOX1 (HAH1) code une chaperonne cytosolique du cuivre qui se lie au Cu(I) et le délivre aux ATPases de type P ATP7A et ATP7B, favorisant le chargement en cuivre dans la voie sécrétoire et le maintien de l’homéostasie cellulaire du cuivre. Par ce rôle de trafic, HAH1 influence la maturation d’enzymes dépendantes du cuivre et contribue à coordonner l’équilibre rédox ainsi que des processus de signalisation sensibles aux métaux. Une régulation anormale de la prise en charge du cuivre médiée par ATOX1 a été associée à des réponses au stress oxydant altérées et à des voies pertinentes pour les troubles du métabolisme du cuivre, offrant un point d’entrée mécanistique pour l’étude de la protéostasie dépendante des métaux. Dans les cellules humaines, ATOX1 sert aussi de nœud modèle pour examiner comment la distribution du cuivre s’articule avec le trafic intracellulaire et l’adaptation au stress.
HAH1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATOX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATOX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATOX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATOX1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.