GW182 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400906

概要

TNRC6Aは、マイクロRNA誘導サイレンシング複合体（miRISC）の中核となる足場タンパク質GW182をコードしており、転写後段階での遺伝子抑制を統括します。GW182はArgonauteタンパク質に結合し、CCR4–NOTおよびPAN2–PAN3デアデニラーゼ複合体をリクルートすることで、細胞質Pボディ内におけるmRNAのポリ(A)鎖短縮（デアデニル化）、デキャッピング、翻訳阻害を促進します。これらの相互作用を介してTNRC6Aは、細胞周期制御、分化、ストレス応答、自然免疫シグナル伝達に影響するマイクロRNA制御下の遺伝子発現プログラムの形成に寄与します。GW182に関連するサイレンシングネットワークの破綻は、がんや神経疾患を含む複数の疾患状況で観察される異常なトランスクリプトーム制御と関連づけられており、TNRC6Aは機構的RNA生物学研究における有用な結節点となります。

GW182 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTNRC6A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TNRC6A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TNRC6Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GW182タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GW182シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TNRC6A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GW182の機能に不可欠なTNRC6Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TNRC6Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GW182 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGW182 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TNRC6A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GW182 HDRプラスミド（h）および GW182 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTNRC6Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTNRC6A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。