Plasmide Double Nickase (m) GTBP: sc-421718-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GTBP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GTBP Double Nickase (m) et le plasmide GTBP Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Msh6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GTBP Antibody (E-8): sc-137015
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GTBP | sc-421718-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) GTBP | sc-421718-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La protéine Msh6 de souris code GTBP, un composant essentiel du complexe de reconnaissance des mésappariements MutSα avec MSH2, qui détecte les mésappariements base–base ainsi que les boucles d’insertion/délétion survenant lors de la réplication et de la recombinaison de l’ADN. En initiant la réparation des mésappariements de l’ADN, GTBP contribue au maintien de la stabilité du génome, limite l’accumulation de mutations et interagit avec les processus de réparation couplés à la réplication et de signalisation des dommages. La perturbation de Msh6 altère la fidélité de la réparation des mésappariements, augmente l’instabilité des microsatellites et modifie les réponses cellulaires au stress de réplication. En recherche biomédicale, Msh6/GTBP est largement utilisé pour étudier les mécanismes de mutagenèse et les relations génotype–phénotype dans les voies de réparation de l’ADN associées au cancer.
GTBP Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Msh6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Msh6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Msh6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Msh6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.