G_{β 3} Double Nickaseプラスミド (h): sc-404511-NIC

GNB3はヒトのGβ3サブユニットをコードしており、活性化されたGPCRを下流のエフェクターへ結び付けるヘテロ三量体Gタンパク質の中核構成要素である。Gβ3はGγサブユニットと必須の二量体を形成し、アデニリルシクラーゼ、ホスホリパーゼCβ、イオンチャネルといったシグナル伝達の要所を制御することで、cAMPやCa²⁺動態を含むセカンドメッセンジャー出力を形成する。これらの経路を通じて、Gβ3は多様な組織における増殖、分泌、走化性などの細胞状態の意思決定に影響する。GNB3の遺伝的多型や発現変化は、個体間のGPCRシグナル伝達の差異や、心血管・代謝、免疫、神経行動に関わる表現型の感受性形質との関連が報告されており、シグナル伝達研究における機構的標的としての有用性を支持している。

Gβ 3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GNB3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GNB3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GNB3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GNB3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。