Plásmido CRISPR de Activación (m) G_{β 1}: sc-420606-ACT

El gen **Gnb1** de ratón codifica la subunidad **Gβ1** de las proteínas G heterotriméricas, un socio obligatorio de **Gγ** que acopla los GPCR activados a los efectores aguas abajo. Los complejos que contienen Gβ1 regulan la propagación de la señal hacia vías como **adenilato ciclasa/AMPc**, **fosfolipasa Cβ/flujo de Ca²⁺**, la **modulación de canales iónicos** y la **señalización MAPK**, dando forma así a la neurotransmisión, la señalización sensorial y las respuestas hormonales. Mediante el control de la dinámica de los segundos mensajeros y de la maquinaria de desensibilización de receptores, Gβ1 influye en decisiones del estado celular, como la excitabilidad, la proliferación y la migración. La señalización GPCR–proteína G desregulada y la actividad alterada de GNB1 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neurológicos, así como con desequilibrios de señalización más amplios relevantes para procesos oncogénicos y metabólicos en modelos experimentales.

Gβ 1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gnb1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gβ 1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gnb1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gnb1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gβ 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gnb1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gβ 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gβ 1 en células tumorales con expresión de Gnb1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.