G_{α t2} CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401528

概要

GNAT2はトランスデューシンのαサブユニット（Gαt2）をコードしており、光受容（フォトトランスダクション）において、活性化されたオプシンを下流エフェクターへ結び付けるヘテロ三量体Gタンパク質の構成要素です。GPCRが刺激されると、Gαt2はGDPをGTPに交換し、Gβγから解離して、環状ヌクレオチドシグナルを調節することで、細胞の興奮性や刺激依存的な応答の形成に関与します。GNAT2は網膜のシグナル伝達の文脈で最もよく特徴づけられている一方で、GPCR–Gタンパク質カップリング、GTPアーゼサイクルの制御、ならびにcGMP代謝やイオンチャネル制御と連動するシグナル終結機構を研究するための扱いやすい切り口も提供します。GNAT2の遺伝学的撹乱は遺伝性の視覚機能障害表現型と関連づけられており、感覚シグナル伝達の欠陥や経路補償をモデル化する上での重要性が示されています。

Gα t2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGNAT2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GNAT2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GNAT2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gα t2 タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gα t2 シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GNAT2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gα t2 の機能に不可欠なGNAT2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GNAT2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gα t2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGα t2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GNAT2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gα t2 HDRプラスミド（h）および Gα t2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGNAT2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGNAT2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。