G_{α o} CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400897

概要

GNAO1は、ヒトのヘテロ三量体Gタンパク質αサブユニットであるGαoをコードする。GαoはGi/oファミリーの主要なシグナル伝達成分で、ニューロンに豊富に発現し、活性化されたGPCRをアデニリルシクラーゼの抑制およびイオンチャネルの調節へと結び付ける。cAMP/PKAシグナル、Ca2+およびK+チャネル活性、さらに下流のMAPKや神経伝達物質放出経路を制御することで、Gαoはシナプス伝達、神経細胞の興奮性、神経回路網の発達を形作る。GNAO1機能の変化は神経発達障害や運動障害の表現型と関連しており、細胞および神経モデルにおいてGPCR駆動型シグナル伝達アーキテクチャを検証するための重要な結節点となる。GNAO1を実験的に攪乱することで、受容体カップリングの特異性、セカンドメッセンジャー動態、活動依存的な転写応答に関する機序研究が可能になる。

Gα o CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGNAO1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GNAO1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GNAO1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gα oタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gα oシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GNAO1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gα oの機能に不可欠なGNAO1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GNAO1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gα o CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGα o CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GNAO1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gα o HDRプラスミド（h）および Gα o HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGNAO1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGNAO1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。