G_{α i-2} CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400568

概要

GNAI2は、ヒトの抑制性Gタンパク質αサブユニットであるGαi-2をコードしている。Gαi-2はGPCRシグナル伝達の中核となるトランスデューサーであり、アデニリルシクラーゼ活性を抑制して細胞内cAMPを低下させ、下流のPKAおよびMAPKに連結した応答を調節する。多様な受容体との共役を介して、Gαi-2はカルシウムシグナル、イオンチャネル制御、走化性、細胞骨格リモデリングに影響し、細胞移動や免疫細胞の活性化プログラムを形作る。GNAI2シグナルの変化は、がんや免疫関連疾患を含む複数の病態において観察される、炎症経路の制御異常や異常な増殖シグナルと関連づけられてきた。これらの特性により、GNAI2はヒト細胞におけるGPCR経路の配線、セカンドメッセンジャー動態、文脈依存的なシグナル可塑性を解明するための有用な解析ノードとなる。

Gα i-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGNAI2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GNAI2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GNAI2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gα i-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gα i-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GNAI2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gα i-2の機能に不可欠なGNAI2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GNAI2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gα i-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGα i-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GNAI2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gα i-2 HDRプラスミド（h）および Gα i-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGNAI2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGNAI2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。