Gα 15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-403266-KO-2

概要

GNA15は、ヒトのヘテロ三量体Gタンパク質αサブユニットであるGα15をコードしており、多様なGタンパク質共役型受容体（GPCR）をホスホリパーゼCβ（PLCβ）の活性化へと結び付ける、Gqファミリーに属する広い受容体選択性（プロミスキュア）をもつメディエーターです。受容体が活性化されると、Gα15はイノシトール三リン酸（IP3）およびジアシルグリセロール（DAG）を介したシグナル伝達を促進し、細胞内Ca²⁺動員、プロテインキナーゼC（PKC）活性、ならびに分泌、走化性、炎症応答を形作る下流の転写プログラムを誘導します。このシグナル軸はMAPKなどのセカンドメッセンジャー経路とも交差し、免疫系および造血系の文脈における細胞活性化状態に影響を与えます。GPCR–Gα15のカップリング異常やCa²⁺依存性シグナルの制御破綻は、がんや炎症に関連する表現型との関与が示唆されており、受容体の配線変更（リワイヤリング）やシグナル統合の機序解析における研究対象として有用です。

Gα 15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるGNA15遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GNA15内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GNA15のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gα 15タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gα 15シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GNA15欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gα 15の機能に不可欠なGNA15エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GNA15ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gα 15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGα 15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GNA15遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gα 15 HDRプラスミド（h）および Gα 15 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGNA15ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGNA15標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。