G_{α 14} CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404556-ACT

GNA14 は、ヒトの三量体Gタンパク質のαサブユニットである Gα14 をコードしており、活性化された GPCR をホスホリパーゼC-β（PLC-β）シグナル伝達へと結びつける Gq/11 ファミリーの一員です。受容体が活性化されると、Gα14 は PIP2 の加水分解を促進して IP3 と DAG を産生し、細胞内 Ca2+ の動員、プロテインキナーゼC（PKC）の活性化、さらに分泌・平滑筋収縮・免疫細胞シグナル伝達に関わる下流の転写プログラムを駆動します。この経路は、増殖、細胞骨格の再構築、細胞移動を協調的に制御する MAPK および Rho GTPase 経路とも交差します。GNA14 が関与する GPCR–Gq シグナルの破綻は、増殖性および炎症性の状況におけるシグナル状態の変化と関連づけられており、疾患関連の細胞モデルで研究対象とする意義が支持されています。

Gα 14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNA14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gα 14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNA14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNA14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gα 14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNA14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGα 14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNA14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGα 14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。