GSTP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402084-NIC

GSTP1は、細胞質に局在する第II相解毒酵素であるグルタチオンS-トランスフェラーゼ・パイ1（glutathione S-transferase pi 1）をコードし、求電子性化合物に対するグルタチオン抱合反応を触媒することで、レドックス恒常性の維持や酸化ストレスに対する細胞防御を支えます。GSTP1は生体異物代謝に関与するとともに、タンパク質間相互作用を介してJNKなどのMAPK経路の調節を含むストレス応答性シグナル伝達を調整します。GSTP1の発現変化やプロモーターのメチル化は、複数のがん関連コンテキストにおいて抗酸化能や細胞ストレス応答の変化と関連づけられており、解毒状態の指標（マーカー）として研究されることが多いです。これらの機能により、GSTP1はヒト細胞における代謝ストレス、薬剤応答機構、ならびにレドックス制御型シグナル伝達ネットワークを検討する上で有用な標的となります。

GSTP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GSTP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GSTP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GSTP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GSTP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。