Plásmido Doble Nickase (h) GSK3 beta: sc-400090-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GSK3 beta consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GSK3 beta (h) y el plásmido de doble nickasa GSK3 beta (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GSK3B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GSK3 beta Anticuerpo (E-11): sc-377213
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GSK3 beta | sc-400090-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GSK3 beta | sc-400090-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **GSK3B** codifica la quinasa de la glucógeno sintasa-3 beta (**GSK3 beta**), una quinasa de serina/treonina constitutivamente activa que integra señales procedentes de vías de factores de crecimiento, del metabolismo y del estrés. GSK3 beta es un nodo clave en la señalización **PI3K–AKT** y en la regulación de **Wnt/β-catenina**, e influye en el control dependiente de la fosforilación del metabolismo del glucógeno, la progresión del ciclo celular, la apoptosis y la diferenciación. Mediante la modulación de factores de transcripción y reguladores del citoesqueleto, determina rutas que gobiernan la función neuronal, la respuesta a la insulina y la señalización inflamatoria. La actividad desregulada de GSK3B y el desequilibrio de las vías Wnt/AKT se estudian con frecuencia en la biología del cáncer, la neurodegeneración y los mecanismos de las enfermedades metabólicas.
GSK3 beta El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSK3B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSK3B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSK3B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSK3B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.