group IID sPLA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422283
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- group IID sPLA2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico group IID sPLA2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
group IID sPLA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422283 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Pla2g2d codifica la fosfolipasi A2 secretoria (sPLA2) di gruppo IID, un enzima extracellulare che idrolizza i fosfolipidi di membrana liberando acidi grassi liberi e lisofosfolipidi, modellando i pool di mediatori lipidici che alimentano gli eicosanoidi e vie di segnalazione correlate. Nei tessuti murini ricchi di attività immunitaria, la sPLA2 di gruppo IID contribuisce alla regolazione del tono infiammatorio modulando la funzione delle cellule presentanti l’antigene, i programmi citochinici e le reti lipidiche associate alla risoluzione. Attraverso effetti sulla disponibilità di acido arachidonico e sulla biosintesi a valle di prostaglandine/leucotrieni, Pla2g2d collega il rimodellamento dei fosfolipidi al crosstalk tra immunità innata e adattativa. Nei modelli preclinici, un’espressione o un’attività disregolata è stata associata a una suscettibilità alterata a patologie infiammatorie e al rimodellamento tissutale guidato dal sistema immunitario.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO group IID sPLA2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pla2g2d in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pla2g2d insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pla2g2d a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina group IID sPLA2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pla2g2d per lo studio della segnalazione di group IID sPLA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pla2g2d critici per la funzione di group IID sPLA2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pla2g2d per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pla2g2d. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal group IID sPLA2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR group IID sPLA2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pla2g2d per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pla2g2d definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.