group IID sPLA₂ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422283

概要

Pla2g2dは、グループIIDの分泌型ホスホリパーゼA2（sPLA2）をコードしている。これは細胞外で作用する酵素で、膜リン脂質を加水分解して遊離脂肪酸およびリゾリン脂質を放出し、エイコサノイドをはじめとする関連シグナル伝達経路に流入する脂質メディエーターのプール形成に関与する。免疫活性の高いマウス組織では、グループIID sPLA2が抗原提示細胞の機能、サイトカイン産生プログラム、ならびに炎症収束に関わる脂質ネットワークを調節することで、炎症の基調（トーン）の制御に寄与する。アラキドン酸の利用可能性と、その下流にあるプロスタグランジン／ロイコトリエン生合成への影響を通じて、Pla2g2dはリン脂質リモデリングと自然免疫・獲得免疫のクロストークを結び付ける。前臨床モデルでは、その発現や活性の異常が、炎症性病態への感受性の変化や、免疫駆動性の組織リモデリングの変化と関連することが報告されている。

group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPla2g2d遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pla2g2d内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pla2g2dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、group IID sPLA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、group IID sPLA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pla2g2d欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• group IID sPLA2の機能に不可欠なPla2g2dエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pla2g2dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• group IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびgroup IID sPLA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pla2g2d遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  group IID sPLA2 HDRプラスミド（m）および group IID sPLA2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPla2g2dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPla2g2d標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。