GRO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420697

概要

マウスCxcl1はGRO1をコードしており、主にCXCR2を介してシグナルを伝達する分泌型CXCケモカインです。これにより、好中球およびその他の骨髄系細胞集団の走化性と活性化が促進されます。GRO1は自然免疫シグナル伝達に関与し、炎症性サイトカインのネットワークを増幅するとともに、NF-κBおよびMAPKに連動する経路を通じて血管内皮の活性化や白血球の血管外遊走（エクストラバゼーション）に寄与します。CXCL1/GRO1の発現異常は、炎症性の組織傷害、防御免疫の変調、ならびに感染症やがん生物学に関連する微小環境の変化と関連しています。実験系では、Cxcl1はケモカイン勾配、白血球トラフィッキング、炎症駆動性リモデリングの解析に広く用いられています。

GRO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCxcl1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cxcl1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cxcl1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRO1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRO1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cxcl1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRO1の機能に不可欠なCxcl1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cxcl1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGRO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cxcl1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRO1 HDRプラスミド（m）および GRO1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCxcl1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCxcl1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。