GROα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403256-ACT

CXCL1はケモカインGROαをコードしており、これは分泌型のELR+ CXCリガンドとしてCXCR2に結合し、好中球の走化性、血管内皮の活性化、ならびに炎症性サイトカインネットワークを促進します。GROαはNF-κBおよびMAPK経路を含む自然免疫のシグナル伝達カスケードに関与し、急性・慢性炎症における白血球のリクルートや組織リモデリングを規定します。CXCL1/GROαの発現異常は、複数の疾患状況で観察される炎症性微小環境や、間質―免疫相互作用の変化と関連付けられており、ケモカイン駆動性の細胞遊走や傍分泌シグナル伝達を解析するうえで有用な分子ノードとなります。in vitroおよびin vivoモデルでは、CXCL1はしばしば、濃度勾配の感知、骨髄系細胞の移動、ならびに炎症に伴う上皮・血管コンパートメントの変化を研究する目的で利用されます。

GROα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CXCL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GROα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CXCL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCXCL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GROαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCXCL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGROα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCXCL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGROα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。