Plásmido CRISPR de Activación (h) GROα: sc-403256-ACT

CXCL1 codifica la quimiocina GROα, un ligando CXC ELR+ secretado que se une a CXCR2 para promover la quimiotaxis de neutrófilos, la activación endotelial y redes de citocinas inflamatorias. GROα participa en cascadas de señalización de la inmunidad innata, incluidas las vías de NF-κB y MAPK, moldeando el reclutamiento de leucocitos y la remodelación tisular durante la inflamación aguda y crónica. La expresión desregulada de CXCL1/GROα se ha asociado con microambientes inflamatorios y con interacciones estroma–inmunitarias alteradas observadas en múltiples contextos de enfermedad, lo que la convierte en un nodo molecular útil para desentrañar la migración celular impulsada por quimiocinas y la señalización paracrina. Los modelos in vitro e in vivo suelen aprovechar CXCL1 para estudiar la detección de gradientes, el tráfico mieloide y los cambios asociados a la inflamación en compartimentos epiteliales y vasculares.

GROα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CXCL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GROα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CXCL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CXCL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GROα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CXCL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GROα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GROα en células tumorales con expresión de CXCL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.