GRHL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404946

概要

GRHL3（grainyhead-like transcription factor 3）は、配列特異的な転写調節因子であり、上皮の分化、バリア形成、ならびに創傷応答性の遺伝子プログラムを統合的に制御します。角化細胞の増殖と終末分化ネットワークを調節することで表皮の恒常性維持に寄与し、細胞極性や接着、構造遺伝子・接着結合関連遺伝子の転写制御を担う経路とも交差します。GRHL3 活性の異常は、発生異常や上皮性病変と関連づけられており、扁平上皮や癌関連の転写状態を扱う研究では発現パターンの変化が報告されています。上皮の遺伝子発現を形作る核内因子として、GRHL3 は組織形態形成、ストレス応答、系譜決定のモデルでしばしば解析対象となります。

GRHL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRHL3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRHL3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRHL3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRHL3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRHL3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRHL3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRHL3の機能に不可欠なGRHL3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRHL3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRHL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGRHL3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRHL3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRHL3 HDRプラスミド（h）および GRHL3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRHL3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRHL3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。