GRB14 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405224-ACT

GRB14（growth factor receptor-bound protein 14）は、活性化した受容体型チロシンキナーゼに結合して下流のシグナル伝達を調節するアダプタータンパク質であり、インスリン受容体およびIGF1Rシグナル伝達に影響する相互作用がよく解析されています。細胞膜上のシグナル複合体に関与することで、GRB14はPI3K–AKT経路やMAPK経路の出力に影響を与え、細胞の代謝、増殖、生存といったプログラムを形作ります。GRB14の発現量や活性の変化は、インスリンシグナルの破綻や代謝表現型の異常と関連づけられており、またその経路上の位置づけから、がん生物学で研究される増殖因子依存的な細胞状態とも関係があります。GRB14を実験的に操作することは、ヒト細胞モデルにおける受容体近傍のシグナル、フィードバック制御、経路間クロストークの機構解析を支える手段となります。

GRB14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GRB14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GRB14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GRB14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGRB14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GRB14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGRB14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGRB14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGRB14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGRB14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。