granzyme B Double Nickase Plasmid (m): sc-420745-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das granzyme B Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- granzyme B Double-Nickase-Plasmid (m) und granzyme B Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Gzmb abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: granzyme B: sc-8022
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
granzyme B Double Nickase Plasmid (m) | sc-420745-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
granzyme B Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420745-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Gzmb** kodiert **Granzyme B**, eine zytotoxische Serinprotease, die in lytischen Granula aktivierter **CD8+-T-Zellen** und **NK-Zellen** gespeichert und an immunologischen Synapsen freigesetzt wird, um Zielzellen zu eliminieren. Nach der perforinvermittelten Einschleusung in das Zytosol spaltet Granzyme B zentrale Substrate und löst dadurch apoptotische und inflammatorische Programme aus, darunter die Aktivierung von Caspasen sowie die Proteolyse intrazellulärer Proteine, die die Zelltod-Signalgebung verstärken. Die Aktivität von Gzmb ist entscheidend für die Effektorfunktion zytotoxischer Lymphozyten und prägt die antigenspezifische Immunität; sie ist breit relevant für Immunüberwachung, Immunpathologie und Gewebeschädigung in entzündlichen Kontexten. Eine Fehlregulation der Expression oder Aktivität von Granzyme B wurde in Mausmodellen mit veränderter Zytotoxizität von Immunzellen in Verbindung gebracht und kann den Schweregrad autoimmunähnlicher Entzündungen, von Infektionsantworten sowie von Tumor–Immun-Interaktionen beeinflussen.
granzyme B Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Gzmb-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Gzmb abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Gzmb-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Gzmb-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.