granzyme A Double Nickase Plasmid (h): sc-403958-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das granzyme A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- granzyme A Double-Nickase-Plasmid (h) und granzyme A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GZMA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: granzyme A: sc-56115
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
granzyme A Double Nickase Plasmid (h) | sc-403958-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
granzyme A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403958-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane GZMA-Gen kodiert Granzyme A, eine Serinprotease, die in den Granula zytotoxischer Lymphozyten gespeichert und während der Bildung der immunologischen Synapse freigesetzt wird, um Zielzellen zu schädigen. Granzyme A wird perforinabhängig in die Zielzelle eingebracht und löst caspaseunabhängige Zelltodprogramme aus, die mit Schäden an einzelsträngiger DNA, mitochondrialer Dysfunktion und inflammatorischer Signalgebung verbunden sind. Seine Aktivität greift in zytotoxische Effektorwege von NK-Zellen und CD8+-T-Zellen ein und kann Zytokinantworten durch Spaltung intrazellulärer Substrate modulieren. Eine dysregulierte GZMA-Expression oder -Aktivität wurde mit immunvermittelter Gewebeschädigung und veränderter Anti-Tumor-Immunüberwachung in Verbindung gebracht, was GZMA zu einem nützlichen Marker und funktionellen Knotenpunkt in Studien zu Entzündung und Krebsimmunologie macht.
granzyme A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GZMA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GZMA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GZMA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GZMA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.