GRAF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403652

概要

ARHGAP26は、Rhoファミリーシグナル伝達を負に制御するRho GTPase活性化タンパク質であるGRAFをコードしており、アクチン細胞骨格の再構築、膜輸送、細胞形態の変化を協調的に調節します。GRAFは、そのGAP活性とエンドサイトーシスおよび細胞骨格制御因子との相互作用を通じて、Rho依存性経路をクラスリン介在性エンドサイトーシスや接着動態と結び付け、細胞移動や極性に影響を与えます。ARHGAP26の機能異常は、がん関連プロセスにおける細胞骨格制御の破綻と関連づけられているほか、反復性の遺伝子再構成を介して血液悪性腫瘍にも関与するとされており、シグナル伝達の再配線や細胞の形質転換における役割の解明が求められています。

GRAF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるARHGAP26遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ARHGAP26内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ARHGAP26のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRAFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRAFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ARHGAP26欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRAFの機能に不可欠なARHGAP26エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ARHGAP26ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRAF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGRAF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ARHGAP26遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRAF HDRプラスミド（h）および GRAF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはARHGAP26ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のARHGAP26標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。