Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR88: sc-403566-ACT

GPR88 codifica un receptor huérfano acoplado a proteína G que está altamente enriquecido en las neuronas espinosas medianas del cuerpo estriado y ayuda a ajustar la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica. A través de su acoplamiento a proteínas G heterotriméricas, GPR88 se vincula con la modulación de la señalización dependiente de AMPc, las cascadas de quinasas aguas abajo y los programas de transcripción dependientes de la actividad que moldean la función de los circuitos corticoestriatales. La alteración de la expresión o la señalización de GPR88 se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, incluidos cambios en el control motor, las conductas relacionadas con la recompensa y los procesos cognitivos. Estas características hacen de GPR88 una diana útil para desentrañar vías reguladas por GPCR en modelos neuronales humanos y para estudiar respuestas de redes génicas en células de linaje estriatal.

GPR88 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPR88 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR88 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPR88 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPR88, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR88. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPR88 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR88 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR88 en células tumorales con expresión de GPR88 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.