GPR40 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401434

Visão geral

FFAR1 codifica o recetor de ácidos gordos livres 1 (GPR40), um recetor acoplado à proteína G ativado por ácidos gordos de cadeia média e longa, que se acopla principalmente à via de sinalização Gq/11. Após a ativação, o GPR40 promove a atividade da fosfolipase C, a mobilização de cálcio intracelular e vias de quinases a jusante que regulam o acoplamento estímulo-secreção e as respostas metabólicas celulares. Nas ilhotas pancreáticas e em tecidos metabólicos relacionados, este recetor integra sinais derivados de lípidos com a deteção de nutrientes para influenciar a dinâmica de secreção de insulina e redes mais amplas de homeostase da glicose. A desregulação da sinalização FFAR1/GPR40 tem sido associada a fenótipos ligados a doenças metabólicas, incluindo alterações da função das células beta e sinalização inflamatória induzida por lípidos, sustentando a sua relevância para estudos mecanísticos em investigação de diabetes e obesidade.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GPR40 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FFAR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FFAR1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FFAR1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GPR40.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FFAR1 para a investigação da sinalização de GPR40, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FFAR1 críticos para a função GPR40
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FFAR1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GPR40 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GPR40 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FFAR1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GPR40 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GPR40 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FFAR1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FFAR1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.