GPR40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401434

概要

FFAR1は遊離脂肪酸受容体1（GPR40）をコードする遺伝子であり、中鎖および長鎖脂肪酸によって活性化されるGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。主にGq/11シグナル伝達に共役します。活性化されると、GPR40はホスホリパーゼC活性、細胞内カルシウム動員、ならびに刺激―分泌連関や細胞の代謝応答を制御する下流のキナーゼ経路を促進します。膵島および関連する代謝組織において、この受容体は脂質由来のシグナルを栄養素センシングと統合し、インスリン分泌動態やより広範なグルコース恒常性ネットワークに影響を与えます。FFAR1/GPR40シグナルの異常は、β細胞機能の変化や脂質駆動性の炎症シグナルなど、代謝疾患に関連する表現型と結び付けられており、糖尿病・肥満研究における機序解明の重要な対象であることを示しています。

GPR40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFFAR1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FFAR1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FFAR1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FFAR1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPR40の機能に不可欠なFFAR1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FFAR1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPR40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPR40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FFAR1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPR40 HDRプラスミド（h）および GPR40 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFFAR1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFFAR1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。