GPR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403659

概要

GPR4は、細胞外の酸性化を細胞内シグナルへと変換する、細胞性pHセンサーとして機能するプロトン感知性Gタンパク質共役受容体（GPCR）をコードする。活性化されると、GPR4は三量体Gタンパク質と共役してcAMP/PKA経路およびホスホリパーゼC依存性経路を調節し、カルシウムフラックス、細胞骨格ダイナミクス、ならびに内皮細胞や免疫細胞の挙動に関わる転写プログラムに影響を及ぼす。その発現は、酸性微小環境が生じやすい血管系および炎症の文脈で高く、内皮活性化、白血球のリクルート、低酸素や炎症に対する組織応答との関連で研究されてきた。GPR4シグナル伝達の変化は、炎症シグナルの破綻や微小環境ストレス応答の異常と関連し、心血管疾患や免疫介在性疾患の病態生物学に関わる可能性が示唆されている。

GPR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGPR4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GPR4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GPR4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GPR4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPR4の機能に不可欠なGPR4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GPR4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GPR4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPR4 HDRプラスミド（h）および GPR4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGPR4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGPR4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。