Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR38 (h): sc-406289

Présentation

Le récepteur de la motiline (MLNR), également connu sous le nom de GPR38, est un récepteur couplé aux protéines G de classe A qui se lie à l’hormone peptidique motiline afin de coordonner la motricité gastro-intestinale interdigestive et de réguler la contractilité des muscles lisses. Lors de son activation, GPR38 recrute des protéines G hétérotrimériques pour moduler la signalisation des seconds messagers, notamment la mobilisation du calcium et des voies kinasiques en aval qui façonnent l’excitabilité des circuits entériques et gastriques. L’expression et la signalisation de MLNR sont utilisées pour explorer les mécanismes contrôlant les complexes moteurs migrants, la vidange gastrique et la communication neuroendocrine au sein de l’intestin. Une activité dérégulée du récepteur de la motiline a été étudiée dans le contexte de troubles gastro-intestinaux fonctionnels et de phénotypes de motilité intestinale altérée, faisant de MLNR une cible pertinente pour des études centrées sur les voies de signalisation dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR38 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MLNR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MLNR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MLNR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR38.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MLNR pour l'étude de la signalisation de GPR38, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MLNR essentiels à la fonction de GPR38
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MLNR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR38 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR38 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MLNR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR38 plasmide HDR (h) et le GPR38 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MLNR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MLNR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.