Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR19 (h): sc-407000

Présentation

GPR19 code un récepteur orphelin couplé aux protéines G (GPCR), principalement localisé à la membrane plasmique, et que l’on pense capable de se coupler à des protéines G hétérotrimériques afin d’influencer la signalisation par seconds messagers ainsi que les programmes transcriptionnels en aval. Bien que son ligand endogène demeure imparfaitement caractérisé, l’activité de GPR19 a été associée à la régulation de l’excitabilité cellulaire, de la signalisation métabolique, et au contrôle, dépendant du contexte, de la prolifération et de la différenciation. Les voies médiées par les GPCR associées à GPR19 peuvent recouper les cascades cAMP/PKA, MAPK/ERK et la signalisation dépendante du calcium, modulant les décisions d’état cellulaire et les réponses au stress. Les altérations des paysages de signalisation des GPCR, notamment l’expression dérégulée de récepteurs orphelins tels que GPR19, sont étudiées dans des affections multifactorielle touchant la neurobiologie, l’inflammation et des phénotypes liés au cancer, ce qui soutient sa pertinence pour les études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR19 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPR19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPR19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR19.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPR19 pour l'étude de la signalisation de GPR19, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPR19 essentiels à la fonction de GPR19
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPR19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPR19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR19 plasmide HDR (h) et le GPR19 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPR19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPR19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.