Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR105 (h): sc-405954

Présentation

P2RY14 code pour GPR105, un récepteur couplé aux protéines G sensible aux sucres UDP, qui détecte les sucres nucléotidiques extracellulaires tels que l’UDP-glucose et des ligands apparentés. La signalisation de GPR105 se couple principalement aux voies Gi pour moduler la dynamique de l’AMPc, la chimiotaxie et des programmes d’expression génique inflammatoires, reliant le stress tissulaire et la libération de métabolites au comportement des cellules immunitaires. Son expression est enrichie dans les populations leucocytaires et a été associée à la régulation des réponses immunitaires innée et adaptative, notamment les fonctions des macrophages et des cellules dendritiques. Une activité dérégulée de P2RY14/GPR105 a été impliquée dans des microenvironnements inflammatoires et des mécanismes immunitaires pertinents dans des contextes de maladies cardiométaboliques et pulmonaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR105 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P2RY14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P2RY14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P2RY14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR105.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P2RY14 pour l'étude de la signalisation de GPR105, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P2RY14 essentiels à la fonction de GPR105
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P2RY14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR105 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR105 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus P2RY14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR105 plasmide HDR (h) et le GPR105 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P2RY14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P2RY14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.