GPNMB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430005

Visão geral

Gpnmb codifica a glicoproteína transmembranar tipo I “glycoprotein non-metastatic melanoma protein B” (GPNMB), enriquecida em macrófagos, células dendríticas, osteoclastos, melanócitos e micróglia. A GPNMB está implicada no tráfego lisossomal e endossomal, na fagocitose, na remodelação da matriz extracelular e em programas de adesão celular que moldam a ativação imune e o reparo tecidual. Sua expressão é frequentemente induzida por sinais inflamatórios e estresse celular, conectando-a a vias que controlam a polarização mieloide, a reabsorção óssea e a biologia da pigmentação. A desregulação de GPNMB tem sido associada a modelos de neuroinflamação e neurodegeneração, à remodelação metabólica e fibrótica e a fenótipos do microambiente tumoral–imune, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos em sistemas murinos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GPNMB (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Gpnmb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Gpnmb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Gpnmb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GPNMB.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Gpnmb para a investigação da sinalização de GPNMB, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Gpnmb críticos para a função GPNMB
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Gpnmb para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GPNMB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GPNMB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Gpnmb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GPNMB Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GPNMB (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Gpnmb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Gpnmb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.