GPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402796

概要

グルコース-6-リン酸イソメラーゼ（GPI）は多機能酵素であり、グルコース-6-リン酸とフルクトース-6-リン酸の可逆的な相互変換を触媒する。これは解糖系と糖新生を結び付ける中心的な段階である。これらの経路を通る炭素フラックスを制御することで、GPIは細胞内ATP産生、生合成前駆体の利用可能性、ならびに酸化還元バランスに影響し、ストレス下での代謝適応の在り方を規定する。さらに、細胞質での代謝的役割にとどまらず、GPIが細胞外シグナル伝達の文脈にも関与し、代謝と細胞運動性や微小環境との相互作用を結び付けることが報告されている。GPI活性または発現の変化は代謝調節異常と関連しており、遺伝性酵素欠損による貧血や、増殖性疾患モデルで観察される代謝リモデリングなどの文脈で研究されてきた。

GPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGPI遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GPI内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GPIのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GPI欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPIの機能に不可欠なGPIエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GPIゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GPI遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPI HDRプラスミド（h）および GPI HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGPIホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGPI標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。