Plásmido Doble Nickase (h) golgin 160: sc-403862-NIC

GOLGA3 codifica la golgina 160, una golgina de tipo “coiled-coil” localizada en el aparato de Golgi que ayuda a organizar la arquitectura del Golgi y favorece el anclaje (tethering) y el tráfico de vesículas entre compartimentos del sistema endomembranoso. Como parte de la vía secretora, la golgina 160 contribuye a la clasificación de la carga y al mantenimiento de la integridad de la cinta del Golgi, influyendo en el procesamiento de proteínas y su entrega a destinos posteriores. La alteración de los programas de anclaje y tráfico del Golgi se asocia con respuestas de estrés celular, señalización modificada y cambios en la polaridad y la migración celular, lo que convierte a GOLGA3 en una diana relevante para estudiar mecanismos que conectan la organización de orgánulos con fenotipos asociados a enfermedad. En investigación biomédica, la función de la golgina 160 suele analizarse en el contexto de la dinámica de membranas, la regulación de la vía secretora y las perturbaciones de la proteostasis dependiente del Golgi.

golgin 160 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GOLGA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GOLGA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GOLGA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GOLGA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.