GnT-V Double Nickase Plasmid (h): sc-403921-NIC

MGAT5 kodiert die N‑Acetylglucosaminyltransferase V (GnT‑V), ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das die Addition von β1,6‑GlcNAc‑Verzweigungen an N‑Glykanen katalysiert. Dadurch steigt die Komplexität der Glykanstrukturen, was Proteinfaltung, -stabilität und -transport beeinflusst. Durch die Umgestaltung der N‑Glykosylierung moduliert GnT‑V die Menge und die Signalstärke von Zelloberflächenrezeptoren und Adhäsionsmolekülen und wirkt damit auf Signalwege ein, die mit Wachstumsfaktorantworten, Zell‑Zell‑Interaktionen und Migration verknüpft sind. Eine veränderte MGAT5‑Aktivität wurde mit fehlregulierten Glykoprotein-Netzwerken in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter krebsassoziierte Veränderungen der Zellsignalisierung und des metastatischen Verhaltens. Als zentraler Regulator des zellulären Glykoms wird MGAT5 häufig im Zusammenhang mit der glykosylierungsabhängigen Regulation der Rezeptorfunktion und immunbezogenen Erkennungsprozessen untersucht.

GnT-V Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MGAT5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MGAT5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MGAT5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MGAT5-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.