GnRH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401425

概要

GNRH1は、視床下部由来の10アミノ酸ペプチドであるゴナドトロピン放出ホルモンI（GnRH I）をコードしており、GnRHR（GPCR）を介して下垂体の性腺刺激ホルモン産生細胞（ゴナドトロフ）に拍動性のシグナルを開始します。これにより、ホスホリパーゼC／IP3–DAG／Ca2+経路およびMAPKの活性化が駆動されます。このシグナル伝達は黄体形成ホルモン（LH）および卵胞刺激ホルモン（FSH）の合成・分泌を調節し、生殖軸の機能、思春期の発来時期、ならびに生殖能（妊孕性）を統合的に制御します。GNRH1の発現変動やペプチドプロセシングの異常は、先天性低ゴナドトロピン性性腺機能低下症を含む視床下部—下垂体—性腺（HPG）軸の調節異常に関連する疾患や、関連する生殖内分泌表現型に関与すると示唆されています。細胞・組織モデルでは、GNRH1は神経内分泌分化、ホルモン分泌ダイナミクス、生殖シグナルプログラムの転写制御の観点から研究されています。

GnRH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGNRH1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GNRH1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GNRH1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GnRH Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GnRH Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GNRH1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GnRH Iの機能に不可欠なGNRH1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GNRH1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GnRH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGnRH I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GNRH1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GnRH I HDRプラスミド（h）および GnRH I HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGNRH1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGNRH1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。