GlyR α3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403621-ACT

GLRA3 kodiert die Glycinrezeptor-α3-Untereinheit (GlyR α3), eine Untereinheit eines ligandengesteuerten Chloridkanals, die eine schnelle inhibitorische Neurotransmission im zentralen Nervensystem vermittelt. Nach Bindung von Glycin trägt GlyR α3 zum Chlorideinstrom, zur Hyperpolarisation der Membran und zur Regulation der neuronalen Erregbarkeit innerhalb synaptischer Signalkreisläufe bei. Die Funktion von GLRA3 überschneidet sich mit der Aktivität inhibitorischer Neurotransmitterrezeptoren, dem transmembranen Ionentransport und Prozessen der synaptischen Plastizität, die die sensorische Verarbeitung und die Stabilität neuronaler Netzwerke prägen. Eine veränderte Expression oder Signalübertragung von GlyR α3 wurde in experimentellen Kontexten mit neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die auf einen gestörten inhibitorischen Tonus zurückgehen, darunter schmerzassoziierte Sensibilisierung und eine erhöhte Anfallsanfälligkeit.

GlyR α3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GLRA3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GlyR α3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GLRA3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GLRA3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GlyR α3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GLRA3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GlyR α3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GlyR α3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GLRA3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.