Plasmide Double Nickase (h) Glutathione reductase: sc-417499-NIC

Le gène humain **GSR** code la glutathion réductase, une oxydoréductase flavoprotéique qui utilise le NADPH pour réduire le glutathion oxydé (GSSG) en glutathion réduit (GSH), maintenant ainsi la capacité de tamponnage rédox de la cellule. En préservant le rapport GSH/GSSG, GSR favorise la détoxification des espèces réactives de l’oxygène et des composés électrophiles, interagit avec l’activité des peroxydases dépendantes du glutathion et contribue au contrôle rédox dans les mitochondries comme dans le cytosol. Cette enzyme est couplée aux voies métaboliques productrices de NADPH, telles que la voie des pentoses phosphates, et aide à maintenir l’homéostasie des thiols, qui influence le repliement des protéines, la signalisation et les défenses antioxydantes. Des altérations du recyclage du glutathion et des déséquilibres rédox sont fréquemment étudiés dans des contextes tels que la sensibilité au stress oxydatif, des phénotypes hémolytiques, des dysfonctions métaboliques et la biologie tumorale, où les voies dépendantes de GSR peuvent moduler la fitness cellulaire et les réponses au stress.

Glutathione reductase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.