Plasmide CRISPR d'Activation (m) Glutathione reductase: sc-420666-ACT

Le gène murin **Gsr** code la glutathion réductase, une oxydoréductase cytosolique dépendante du FAD qui régénère le glutathion réduit (GSH) à partir du glutathion disulfure (GSSG) en utilisant le NADPH. En maintenant le ratio cellulaire GSH/GSSG, la glutathion réductase soutient l’homéostasie rédox, limite l’accumulation d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) et amortit la signalisation dépendante des thiols ainsi que le repliement des protéines. L’activité de Gsr s’interface avec le métabolisme du glutathion, les voies productrices de NADPH telles que la voie des pentoses phosphates, et les réseaux antioxydants incluant les glutathion peroxydases et les peroxyrédoxines. La dérégulation de cet axe est fréquemment étudiée dans des contextes de phénotypes associés au stress oxydatif, notamment l’inflammation, les dysfonctionnements métaboliques et des modèles de lésions cellulaires pertinents pour la neurodégénérescence.

Glutathione reductase Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gsr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glutathione reductase Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gsr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gsr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glutathione reductase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gsr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glutathione reductase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glutathione reductase dans les cellules tumorales présentant une expression de Gsr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.