Plásmido CRISPR de Activación (h) GluR-6: sc-402982-ACT

GRIK2 codifica la subunidad GluR-6 del receptor ionotrópico de glutamato (también denominada subunidad 2 del receptor de kainato), un canal catiónico activado por ligando que media la neurotransmisión excitatoria rápida en el sistema nervioso central. Los receptores que contienen GluR-6 regulan la transmisión y la plasticidad sinápticas mediante el flujo de Na⁺/K⁺ y la señalización de Ca²⁺ dependiente de la actividad, influyendo en la excitabilidad neuronal y el desarrollo de los circuitos. Al modular la despolarización postsináptica y las cascadas de señalización aguas abajo, GRIK2 participa en vías que controlan el aprendizaje, las oscilaciones de red y las respuestas al estrés excitotóxico. La desregulación genética y funcional de la señalización de los receptores de kainato se ha relacionado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como con susceptibilidad a las crisis epilépticas, lo que convierte a GRIK2 en una diana relevante para estudios mecanísticos en neurociencia.

GluR-6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRIK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GluR-6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRIK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRIK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GluR-6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRIK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GluR-6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GluR-6 en células tumorales con expresión de GRIK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.