GluR-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403848-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GluR-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GluR-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und GluR-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRIA3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GluR-3: sc-517202
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GluR-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403848-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GluR-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403848-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIA3 kodiert für die humane ionotrope Glutamatrezeptor‑Untereinheit AMPA‑Typ 3 (GluR‑3), einen liganden-gesteuerten Kationenkanal, der die schnelle exzitatorische synaptische Transmission im zentralen Nervensystem vermittelt. GluR‑3 trägt über Rezeptor-Trafficking, Phosphorylierung und Interaktionen mit Gerüstproteinen der postsynaptischen Dichte zur aktivitätsabhängigen synaptischen Plastizität bei und ist damit mit calciumabhängigen Signalkaskaden und der Erregbarkeit neuronaler Netzwerke verknüpft. Die GRIA3‑abhängige AMPA‑Rezeptorfunktion überschneidet sich mit Signalwegen der glutamatergen Neurotransmission, die Lernen, Gedächtnis und exzitotoxische Stressantworten regulieren. Genetische und funktionelle Störungen von AMPA‑Rezeptoruntereinheiten, einschließlich GRIA3, wurden mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien synaptischer Fehlfunktionen unterstützt.
GluR-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRIA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRIA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRIA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRIA3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.