Plasmide CRISPR d'Activation (h) GLULD1: sc-409944-ACT

Le gène humain **LGSN** code **GLULD1** (également appelé *lengsin*), une protéine enrichie dans le cristallin impliquée dans le maintien de l’homéostasie des protéines cristallines et de l’architecture cellulaire au cours de la différenciation des cellules des fibres du cristallin. Des études fonctionnelles associent LGSN/GLULD1 à l’organisation du cytosquelette et aux processus de protéostasie qui soutiennent la transparence et la résistance à l’agrégation dans les tissus oculaires. Une expression altérée ou un dysfonctionnement de facteurs assurant le maintien des structures du cristallin est pertinent pour la biologie de la cataracte et d’autres troubles caractérisés par un mauvais repliement des protéines et une intégrité du cristallin compromise. Ces caractéristiques font de LGSN une cible utile pour étudier les programmes de différenciation spécifiques aux tissus et les réponses au stress qui influencent la stabilité du protéome.

GLULD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGSN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLULD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGSN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGSN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLULD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGSN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLULD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLULD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LGSN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.