Plásmido Doble Nickase (h) Glucosidase I: sc-405014-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Glucosidase I consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Glucosidase I (h) y el plásmido de doble nickasa Glucosidase I (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MOGS. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Glucosidase I Anticuerpo (C-11): sc-374006
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Glucosidase I | sc-405014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Glucosidase I | sc-405014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El MOGS humano codifica la glucosidasa I, una α-glucosidasa asociada a la membrana del retículo endoplásmico (RE) que cataliza el primer paso de recorte de glucosa durante el procesamiento de glicanos N‑ligados en glicoproteínas nacientes. Este evento temprano de desglucosilación favorece el plegamiento de glicoproteínas y los ciclos de control de calidad del RE que involucran a calnexina/calreticulina, influyendo en la maduración proteica y en el flujo de la vía secretora. Al modular el tráfico y la estabilidad dependientes de glicanos de proteínas de membrana y secretadas, la actividad de MOGS se relaciona con la proteostasis, las respuestas al estrés del RE y las interacciones huésped–patógeno que dependen de la glicosilación. La alteración genética o funcional de MOGS se ha asociado con fenotipos vinculados a trastornos congénitos de la glicosilación y es relevante para estudios mecanísticos de la biogénesis de glicoproteínas en células humanas.
Glucosidase I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MOGS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MOGS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MOGS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MOGS alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.