Plásmido Doble Nickase (h) Glucose Transporter Glut1: sc-400174-NIC

SLC2A1 codifica el transportador facilitador de glucosa GLUT1, un transportador de alta afinidad que media la captación basal de glucosa a través de la membrana plasmática para sostener la glucólisis y el metabolismo oxidativo. La actividad de GLUT1 contribuye a la homeostasis energética y al equilibrio redox, influyendo en la reprogramación metabólica en estados proliferativos y permitiendo que las células se adapten a la hipoxia mediante programas transcripcionales regulados por HIF. Como determinante clave de la disponibilidad de glucosa, SLC2A1 se conecta con la señalización de AMPK y mTOR a través de retroalimentación dependiente del reconocimiento de nutrientes e impacta procesos como la angiogénesis, el transporte a través de la barrera hematoencefálica y la activación de células inmunitarias. La alteración de la expresión o la función de SLC2A1 se asocia con desregulación metabólica y se ha implicado en el metabolismo del cáncer y en defectos neurológicos del transporte de glucosa.

Glucose Transporter Glut1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC2A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC2A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC2A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC2A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.