GLT25D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405631

概要

COLGALT1はGLT25D1をコードしており、GLT25D1は小胞体に局在するコラーゲンのβ(1-O)ガラクトシルトランスフェラーゼで、コラーゲンの翻訳後修飾過程においてヒドロキシリシン残基のガラクトシル化を触媒します。この反応は、コラーゲンの適切な折りたたみ、安定性、分泌を支える段階的な糖鎖付加経路の一部であり、細胞外マトリックスの組み立てや基底膜の構築に影響します。GLT25D1の活性は、小胞体のプロテオスタシスや分泌輸送とも交差しており、コラーゲンの糖鎖修飾が変化すると、マトリックス—細胞間シグナル伝達や組織の力学特性が乱れる可能性があります。COLGALT1を含むコラーゲン糖鎖修飾酵素の遺伝学的破綻や発現異常は、結合組織や発生に関わる表現型と関連づけられており、マトリックス駆動性の線維化、筋骨格系疾患、腫瘍微小環境のリモデリングといった文脈で研究されています。

GLT25D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOLGALT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COLGALT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COLGALT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GLT25D1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GLT25D1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COLGALT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GLT25D1の機能に不可欠なCOLGALT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COLGALT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GLT25D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGLT25D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COLGALT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GLT25D1 HDRプラスミド（h）および GLT25D1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOLGALT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOLGALT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。