GIT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424063

概要

GIT2（Gタンパク質共役受容体キナーゼ相互作用 ArfGAP 2）は、GPCR関連キナーゼや低分子量GTPアーゼからのシグナルを統合することで、膜輸送と細胞骨格リモデリングを協調的に制御する、ARF GTPアーゼ活性化タンパク質（GAP）型の足場タンパク質です。マウス細胞では、GIT2はpaxillin/PIX/PAKからなるシグナル複合体内で機能し、フォーカルアドヒージョンのターンオーバー、細胞の伸展、方向性をもった遊走を制御し、これらの過程をアクチンダイナミクスおよびエンドサイトーシスと結び付けています。また、ストレス応答性シグナル伝達や受容体の内在化にも関与し、接着とシグナル伝達のネットワークを連結することで、環境刺激に対する細胞応答の形成に寄与します。GIT2関連経路の制御異常は、運動性の変化や炎症性シグナル伝達の変調を伴う状況で検討されており、組織リモデリングや疾患関連の細胞挙動の機序研究における重要性が示唆されています。

GIT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGit2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Git2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Git2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GIT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GIT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Git2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GIT2の機能に不可欠なGit2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Git2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GIT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGIT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Git2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GIT2 HDRプラスミド（m）および GIT2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGit2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGit2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。