GHRH-R Double Nickase Plasmid (h): sc-404197-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GHRH-R Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GHRH-R Double-Nickase-Plasmid (h) und GHRH-R Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GHRHR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GHRH-R Double Nickase Plasmid (h) | sc-404197-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GHRH-R Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404197-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GHRHR kodiert den Rezeptor für das Wachstumshormon-freisetzende Hormon (GHRH‑R), einen GPCR der Klasse B, der vor allem in somatotropen Zellen des Hypophysenvorderlappens exprimiert wird. Dort bindet er hypothalamisches GHRH und reguliert so die Synthese und Sekretion von Wachstumshormon. Die Rezeptoraktivierung schaltet primär den Gs–Adenylatcyclase-Signalweg ein, erhöht dadurch cAMP und aktiviert PKA-abhängige Transkriptionsprogramme; zusätzlich besteht eine Kopplung an MAPK- sowie calciumabhängige Signalwege, die die Proliferation und Differenzierung endokriner Zellen beeinflussen. Veränderungen der GHRHR-Funktion stehen mit einer fehlregulierten Aktivität der somatotropen Achse in Zusammenhang und wurden mit Phänotypen eines Wachstumshormonmangels sowie Entwicklungsanomalien der Hypophyse assoziiert. In peripheren Geweben und Tumormodellen wird die GHRH/GHRHR-Signalgebung außerdem genutzt, um cAMP-getriebene Transkription, Zellzykluskontrolle und parakrine Wachstumsfaktor-Netzwerke zu untersuchen.
GHRH-R Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GHRHR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GHRHR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GHRHR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GHRHR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.