Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
GHR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420549
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GHR Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GHR, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GHR Antibody (B-10): sc-137185
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GHR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420549 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il recettore dell’ormone della crescita (GHR), codificato nel topo dal gene *Ghr*, è un recettore citochinico a singolo passaggio di membrana che media il segnale dell’ormone della crescita per regolare la crescita somatica, il metabolismo e l’omeostasi endocrina. La dimerizzazione del recettore indotta dal ligando attiva JAK2 e i programmi trascrizionali a valle mediati da STAT5, con ulteriori interazioni (crosstalk) con le vie PI3K–AKT e MAPK che influenzano proliferazione, gestione dei nutrienti e sopravvivenza cellulare. La segnalazione dipendente da GHR modella la produzione epatica di IGF-1 e la sensibilità sistemica all’insulina, collegando l’attività del recettore a fenotipi di crescita e metabolici. La disfunzione dell’asse GH–GHR è rilevante per la ricerca su disturbi della crescita, insulino-resistenza e rimodellamento tissutale in contesti endocrini e dello sviluppo.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GHR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ghr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ghr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ghr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GHR.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ghr per lo studio della segnalazione di GHR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ghr critici per la funzione di GHR
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ghr per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GHR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GHR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ghr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GHR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GHR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ghr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ghr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.