Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
GHR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420549
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GHR El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GHR, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GHR Anticuerpo (B-10): sc-137185
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GHR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420549 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El receptor de la hormona del crecimiento (GHR), codificado por el gen Ghr del ratón, es un receptor de citocinas de paso único que media la señalización de la hormona del crecimiento para regular el crecimiento somático, el metabolismo y la homeostasis endocrina. La dimerización del receptor inducida por el ligando activa JAK2 y programas transcripcionales posteriores dependientes de STAT5, con crosstalk adicional con las vías PI3K–AKT y MAPK, que influyen en la proliferación, el manejo de nutrientes y la supervivencia. La señalización dependiente de GHR modula la producción hepática de IGF-1 y la sensibilidad sistémica a la insulina, vinculando la actividad del receptor con fenotipos de crecimiento y metabólicos. La desregulación del eje GH–GHR es relevante para la investigación de trastornos del crecimiento, resistencia a la insulina y remodelado tisular en contextos endocrinos y del desarrollo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GHR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ghr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ghr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ghr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GHR.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ghr para la investigación de la señalización de GHR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ghr críticos para la función de GHR
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ghr para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GHR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GHR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ghr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GHR (m) y el plásmido HDR GHR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ghr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ghr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.