GHR CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420549-ACT

Das Mausgen **Ghr** kodiert den Wachstumshormonrezeptor (GHR), einen transmembranen Zytokinrezeptor, der Wachstumshormon bindet und dadurch somatisches Wachstum, Stoffwechsel und Gewebehomöostase reguliert. Die Ligandenbindung fördert die Dimerisierung des Rezeptors und die Aktivierung von JAK2, was nachgeschaltete STAT5-Signale sowie eine Signal-Kreuzkopplung mit den PI3K–AKT- und MAPK/ERK-Wegen auslöst, um Transkriptionsprogramme für Proliferation, Differenzierung und Nährstoffverwertung zu steuern. Die GHR-Aktivität beeinflusst die hepatische IGF‑1-Produktion und wirkt auf die Physiologie von Fettgewebe, Muskel und Knochen, wodurch sie eine zentrale Rolle in der endokrinen Regulation von Wachstum und Energiebilanz einnimmt. Eine fehlregulierte GHR-Signalgebung wurde mit veränderten Wachstumsphänotypen und metabolischen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Entwicklungsbiologie, des Alterns und der Umgestaltung endokriner Signalwege untersucht.

GHR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ghr-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GHR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ghr-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ghr-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GHR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ghr-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GHR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GHR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ghr-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.