Plásmido CRISPR de Activación (h) GGT5: sc-405055-ACT

El gen humano **GGT5** codifica la **gamma‑glutamiltransferasa 5**, una enzima de superficie celular que hidroliza el enlace gamma‑glutamilo del glutatión y de conjugados relacionados para favorecer el recambio extracelular de glutatión y el rescate de aminoácidos. A través de su papel en el ciclo gamma‑glutamilo, **GGT5** contribuye a la homeostasis redox, a la disponibilidad de cisteína y al metabolismo de intermediarios derivados del glutatión, con efectos posteriores sobre la señalización del estrés oxidativo y los procesos celulares de desintoxicación. La actividad de **GGT5** se ha estudiado en contextos que incluyen microambientes inflamatorios, el metabolismo de lípidos y xenobióticos, y la regulación tisular específica del equilibrio oxidativo, lo que la hace relevante para vías asociadas a enfermedades en las que el estado redox y el manejo del glutatión están alterados. Estas características sitúan a **GGT5** como un nodo útil para analizar cómo el catabolismo del glutatión influye en la señalización, la adaptación metabólica y las respuestas celulares al estrés.

GGT5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GGT5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GGT5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GGT5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GGT5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GGT5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GGT5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GGT5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GGT5 en células tumorales con expresión de GGT5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.